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豬輪狀病毒抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）
使用說明書
產品名稱
通用名：豬輪狀病毒抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）
包裝規(guī)格
96T×1/盒
檢測原理
本試劑盒由預包被豬輪狀病毒重組蛋白的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成，應用酶聯免疫法（ELISA）原理檢測豬血清、血漿樣本中豬輪狀病毒抗體。實驗時在酶標板中加入對照血清和待檢樣本，經溫育后若樣品中含有豬輪狀病毒抗體，則將與酶標板上抗原結合，經洗滌除去未結合的其他成分后；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發(fā)生特異性結合；再經洗滌除去未結合的酶標記物，在孔中加TMB底物液，與酶標結合物反應形成藍色產物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關；加入終止液終止反應后，產物變?yōu)辄S色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有豬輪狀病毒抗體。
試劑盒組成
序號 | 名稱 | 規(guī)格/96T×1 |
1 | 酶標記物 | 12ml×1(紅蓋) |
2 | 樣品稀釋液 | 22ml×1(黃蓋) |
3 | 20X濃縮洗滌液 | 40ml×1(藍蓋) |
4 | 底物液A | 6ml×1(白蓋) |
5 | 底物液B | 6ml×1(黑蓋) |
6 | 終止液 | 12ml×1(黃蓋) |
7 | 陽性對照 | 1.0 ml×1(紅蓋) |
8 | 陰性對照 | 1.0 ml×1(綠蓋) |
9 | 酶標板 | 96T×1 |
10 | 封板膜 | 1 |
11 | 說明書 | 1 |
儲存及有效期
2～8℃保存，有效期12個月。
包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。
適用儀器
含450nm波長的酶標儀，37℃恒溫設備，可調微量移液器。
樣品準備
1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。
2.根據樣本數量準備對應數量的小刻度EP管或血清稀釋盤，用樣品稀釋液將待檢血清按50倍稀釋（如4μl血清加入196μl樣品稀釋液中，混勻）陰性、陽性對照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水加1份濃縮洗滌液)。
檢驗方法
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。
2.取所需用量酶標板條，設陰性、陽性對照各1孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.陰性、陽性對照孔分別加入陰性、陽性對照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻，蓋好蓋板膜，置37℃溫箱孵育30分鐘。
5.甩去孔內液體，每孔加250ul工作洗滌液，用震蕩混勻的方式洗滌60秒后棄去，重復洗滌5次，每次洗滌后需拍干液體。
6.每孔加酶標記物100μl，置37℃避光反應30分鐘。
7.甩去孔內液體，每孔加250ul工作洗滌液，用震蕩混勻的方式洗滌60秒后棄去，重復洗滌5次，每次洗滌后需拍干液體。
8.根據樣本數量將顯色液A與顯色液B按等體積比例混勻配置為底物工作液，現配現用。每孔加100ul，置37℃避光反應10分鐘。
9.每孔加終止液100μl，混勻，于450nm 測定各孔吸光值（OD值），
參考值
實驗正常的情況下，陽性對照OD-陰性對照OD＞0.2。
檢驗結果的解釋
1. S/P＝(樣本OD-陰性對照OD)/(陽性對照OD-陰性對照OD)。
2. S/P≥0.4時結果判讀為陽性。
3. 0.2＜S/P＜0.4時結果為疑似陽性；若接種過對應疫苗，則提示抗體水平不足，建議補打疫苗。
4. S/P＜0.2時結果判讀為陰性。
試驗方法的局限性
1. 本試劑盒僅作為定性檢測豬血清、血漿中豬輪狀病毒抗體的粗略評估。
2. 本試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗。
注意事項
1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.酶標板從冷藏環(huán)境中取出時應恢復至室溫方可開袋，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶，使用時需恢復至室溫以*溶解。
5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應保持新鮮。
7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。
8.不同批號試劑組分不得混用。
生產企業(yè)
企業(yè)名稱：賽諾利康生物技術（北京）有限公司
地 址：北京市昌平區(qū)科技園超前路甲1號11號樓7層
